بررسی اثر فاکتور رشد اپیدرمال بر تکوین جنین‌های 16-8 سلولی موش و بیان ژن گیرنده این فاکتور پس از انجماد شیشه‌ای

چکیده زمینه و هدف: انجماد جنین‌های انسانی یک فعالیت روتین در درمانگاههای درمان ناباروری می‌باشد. تکوین موفقیت‌آمیز و لانه‌گزینی جنین‌های منجمد شده به میزان زیادی به محیط کشت مناسب، فاکتورهای رشد، سایتوکاینها و بیان ژنومی دارد. مطالعات اخیر بیانگر نقش مهم فاکتور رشد اپیدرمال (EGF) و رسپتور آن در تکوین جنین و مراحل لانه‌گزینی می‌باشند. هدف از این مطالعه تعیین تأثیر فاکتور رشد اپیدرمال در تکوین قبل از لانه‌گزینی و بیان رسپتور آن در جنین موش منجمد شده با استفاده از نی کشیده شده می‌باشد. روش بررسی: جنین‌های 16-8 سلولی 66 تا 72 ساعت پس از تزریق HCG از موشهای تحریک تخمک‌گاری شده نژاد NMRI بدست آمدند و به 4 گروه (دو گروه شاهد و دو گروه آزمون) تقسیم شدند. جنین‌های گروه شاهد 1و2 به مدت 96 ساعت در محیط MEM-α -و (+EGF(10 ng/ml MEM-α کشت داده شدند. جنین‌های گروه آزمون 1 و 2 بلافاصله پس از جمع‌آوری منجمد شدند و پس از ذوب به ترتیب در دو محیط MEM-α و MEM-α +EGF (10 ng/ml) برای مدت 96 ساعت کشت داده شدند. تکوین جنین‌ها بطور روزانه ثبت شد. نتایج بدست آمده با استفاده از آزمون بررسی شدند. بررسی بیان ژن گیرنده با روش RT-PCR در جنین‌های خارج شده و یا در حال خروج از زونا صورت گرفت. به دنبال واکنش RT (ترجمه معکوس) واکنش PCR با استفاده از پرایمرهای Nested صورت پذیرفت تا دقت و حساسیت کار افزایش یابد. یافته‌ها: میزان تشکیل بلاستوسیست و خروج از زونا در جنین‌های منجمد شده به میزان قابل توجهی کمتر از جنین‌های غیرمنجمد بود. میزان دژنراسیون در جنین‌های منجمد شده بوضوح بالاتر بود. مقایسه دو گروه شاهد 1 با 2 و آزمون 1 با 2 بصورت دو به دو نشان داد که میزان تشکیل بلاستوسیست، خروج از زونا و دژنراسیون در بین این گروهها از تفاوت معنی‌داری برخوردار نیست. بررسی‌های مولکولی با روش RT-PCR نشان دادند که پس از 96 ساعت کشت جنین‌ها mRNA مربوط به گیرنده فاکتور رشد اپیدرمال در هر 4 گروه شاهد 1و 2، آزمون 1 و 2 بیان می‌شود. نتیجه‌گیری: افزودن EGF با غلظت 10 ng/ml به یک محیط کشت مانند αMEM- هیچگونه تأثیر محرکی بر تکوین جنین‌های منجمد شد و غیرمنجمد ندارد. انجماد باعث ایجاد وقفه در بیان ژن گیرنده فاکتور رشد پس از 96 ساعت کشت جنین‌های منجمد شده، نمی‌شود. کلید واژه‌ها: جنین قبل از لانه گزینی، انجماد جنین، فاکتور رشد اپیدرمال، بیان ژن. وصول مقاله: 28/9/84 اصلاح نهایی: 15/3/85 پذیرش مقاله: 18/3/85